類固醇激素，又稱甾體激素，調(diào)節(jié)人體多種機能，在臨床診斷發(fā)揮著重要的作用。在前面的推文中，我們已經(jīng)分享過一種關(guān)于臨床檢測中19種類固醇激素的反相SPE前處理及相應(yīng)的LC-MS/MS分析方案，這周我們?yōu)榇蠹曳窒砹硪环N前處理方案：固相支撐液液萃?。⊿olid-Supported Liquid Extraction, SLE）方法在其中的應(yīng)用。

SLE操作步驟如下：

PS: pre-spiked samples

PoS: post-spiked samples

圖6 Kinetex C18分離類固醇相關(guān)異構(gòu)體總離子流圖

圖7 部分化合物標(biāo)準(zhǔn)曲線

表6 標(biāo)準(zhǔn)曲線，LLOQ和S/N結(jié)果匯總

圖8 部分化合物L(fēng)LOQ限度譜圖示例

表7 回收率及準(zhǔn)確度結(jié)果

表8 精密度，基質(zhì)效應(yīng)和方法回收率結(jié)果

Kinetex 2.6µm C18色譜柱在正離子和負離子模式下在8min內(nèi)實現(xiàn)了對類固醇相關(guān)異構(gòu)體的良好分離（圖6）。使用二氯甲烷洗脫時，除17羥基孕烯醇酮和DHEAS外，其他組分線性良好，R2>0.99；當(dāng)使用乙酸乙酯洗脫時，所有組分R2>0.98（圖7、表6）。對于準(zhǔn)確度而言，使用二氯甲烷洗脫時，除17羥基孕烯醇酮和DHEAS外都在80%~112%之間，而使用乙酸乙酯洗脫時候，所有組分準(zhǔn)確度都在91%~118%之間（表7）。

此外，使用二氯甲烷洗脫時，回收率在13%~87%之間（表7），其中18羥基皮質(zhì)酮（13%）、醛固酮（21%）、孕酮（28%）、皮質(zhì)醇（24%）和可的松（52%）回收率均較低。在使用乙酸乙酯洗脫時，除DHEAS外，所有組分回收率均在84%~110%之間。本次研究中發(fā)現(xiàn)DHEAS在SLE方法下基本無回收，建議使用反相SPE方式進行前處理。

本方案中所開發(fā)的SLE方法簡便有效可重復(fù)性強，所用到Novum PRO SLE, MAX 96孔板可實現(xiàn)快速、高通量的樣品前處理。分析中用到的Kinetex 2.6µm C18色譜柱也可在8分鐘內(nèi)對相關(guān)類固醇化合物進行有效分離，實現(xiàn)LC-MS/MS方法的準(zhǔn)確定量。